Le test ELISA détecte de nombreuses maladies, c'est pourquoi il a trouvé une large application en médecine et plus encore. Cependant, le test ELISA est surtout connu pour son diagnostic de la maladie de Lyme. Qu'est-ce que le test ELISA? Comment interpréter les résultats? Quel est le prix du test?
Table des matières:
- Test ELISA - que détecte-t-il? Application du test ELISA
- Test ELISA - quel est le test?
- Test ELISA et maladie de Lyme - quand effectuer?
- Test ELISA - prix. Combien coûte un test ELISA?
- Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être des faux positifs?
- Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être faux négatifs?
Le test ELISA, c'est-à-dire le test d'immunosorbant lié à une enzyme, est une méthode de laboratoire couramment utilisée qui sert, entre autres, pour la détection quantitative des anticorps dans le sang.
Pour cette raison, le test ELISA a trouvé une application dans le diagnostic de maladies bactériennes, telles que la borréliose de Lyme.
L'avantage de la méthode ELISA est sa simplicité et la possibilité d'une mise en œuvre rapide ainsi qu'une sensibilité élevée. La méthode ELISA est réalisée à l'aide de plaques en plastique spéciales avec des puits remplis par exemple de protéines Borrelia (antigènes) et d'anticorps monoclonaux spécifiques, qui sont conçus pour détecter les anticorps dans l'échantillon du patient.
Test ELISA - que détecte-t-il? Application du test ELISA
La haute sensibilité et la simplicité de la méthode ELISA l'ont rendue applicable dans le diagnostic de nombreuses maladies, mais elle est surtout connue comme la méthode de diagnostic de la maladie de Lyme.
Dans le cas du diagnostic de la borréliose de Lyme, le soi-disant ELISA indirect, qui permet de détecter des IgM ou des IgG spécifiques dans le matériel testé. De la même manière, les anticorps peuvent être détectés pour le diagnostic:
- infections virales: virus de l'herpès (herpès, herpès zoster, Epstein-Barr, cytomégalovirus), VIH, virus de l'hépatite (VHB et VHC)
- infections à protozoaires: toxoplasmose, giardiase
- maladies auto-immunes: maladie cœliaque (anticorps anti-tTG ou anti-DPG), maladie de Hashimoto (anticorps anti-TG et anti-TPO), maladies inflammatoires de l'intestin (anticorps anti-ASCA et anti-ANCA)
- maladies parasitaires et allergies dans lesquelles des anticorps IgE spécifiques sont détectés. Leur niveau accru peut indiquer la présence d'allergies, par exemple au pollen et à la nourriture, ou une invasion parasitaire (ténia armé, ascaris humain)
Il existe également des modifications de la méthode ELISA (dite ELISA sandwich), qui permettent la détection d'un échantillon de protéines autres que les anticorps. Ensuite, le but du test est de détecter dans le matériel biologique:
- fragments de virus ou de bactéries, le plus souvent il s'agit d'antigènes caractéristiques d'un pathogène donné
- hormones sériques, par exemple œstrogène, prolactine, TSH, fT4, cortisol
- enzymes, par exemple calprotectine, élastase pancréatique, phosphatase alcaline
- marqueurs tumoraux, par exemple CA-125
- la présence de médicaments dans le sérum
Cette méthode est également applicable dans l'industrie alimentaire, où elle peut détecter des traces d'allergènes (ex: lait, arachides), d'OGM ou de toxines dans les aliments.
Test ELISA - de quoi s'agit-il?
Le diagnostic de la borréliose de Lyme par exemple par la méthode ELISA consiste à détecter des protéines immunitaires dans du matériel biologique - des anticorps qui apparaissent lors de la réponse contre les antigènes de Borrelia.
Les anticorps sont testés dans deux classes, IgM et IgG. Les IgM sont les premiers anticorps à apparaître dans le corps lorsqu'ils entrent en contact avec des bactéries, et ils diminuent avec le temps.
Leur place est remplacée par des anticorps IgG plus persistants qui peuvent rester dans l'organisme pendant plusieurs dizaines d'années.
De cette manière, la présence de bactéries dans le corps est indirectement testée en détectant des anticorps spécifiquement dirigés contre les spirochètes Borrelia.
Les anticorps à divers stades de l'infection peuvent être dirigés contre une variété de protéines Borrelia. Par exemple, à un stade précoce, il s'agit de la protéine p41.
Dans les derniers stades, de plus en plus de protéines commencent à apparaître, telles que p21, p30, p39, p43. C'est pourquoi le diagnostic de la maladie de Lyme est extrêmement difficile.
La sélection des protéines bactériennes est extrêmement importante pour que le test ait une valeur diagnostique élevée. Par conséquent, systématiquement dans le diagnostic de la maladie de Lyme, des tests ELISA de génération II ou III doivent être utilisés dans lesquels des ensembles de protéines sont sélectionnés pour obtenir le résultat le plus fiable.
Test ELISA et maladie de Lyme. Quand faire?
La borréliose de Lyme est une maladie bactérienne causée par la bactérie Borrelia burgdorferi et ses nombreuses variétés.
Le diagnostic de la maladie n'est pas facile en raison de la complexité de la réponse immunitaire contre Borrelia et des imperfections des méthodes de laboratoire.
La méthode de laboratoire la plus couramment utilisée est la méthode ELISA hautement sensible, qui détecte des anticorps spécifiques dirigés contre des protéines bactériennes.
Dans le diagnostic de la borréliose de Lyme, une méthode ELISA indirecte est utilisée dans laquelle les étapes suivantes sont distinguées:
- incubation des puits sur la plaque avec du matériel prélevé sur le patient, par exemple du sérum. S'il y a des anticorps contre Borrelia dans le matériel testé, ils se lient aux protéines au fond du puits de réaction
- puis l'excès de sérum est rincé avec un liquide de lavage spécial (tampon) et le soi-disant conjugué, c'est-à-dire un anticorps lié à une enzyme qui se lie à des anticorps précédemment liés dans les puits de réaction
- puis le substrat pour le conjugué est ajouté et une réaction de couleur a lieu (résultat positif) ou aucune réaction de couleur (résultat négatif)
- la dernière étape est la lecture par le lecteur (spectrophotomètre) de la concentration d'anticorps contre Borrelia dans le sérum du patient
Le test ELISA pour la maladie de Lyme est effectué à partir du sang et, en cas de symptômes neurologiques (neuroborréliose), également du liquide céphalo-rachidien.
Le liquide synovial ne doit pas être testé car il existe une forte probabilité de résultats faussement positifs.
La base du diagnostic de la maladie sont les symptômes cliniques qui l'indiquent, confirmés par les résultats des tests de laboratoire.
L'ajout d'un résultat de test de laboratoire sans symptômes n'autorise pas le diagnostic de la maladie de Lyme, car il a été démontré que des anticorps contre Borrelia sont également détectés chez des personnes en bonne santé.
Le diagnostic sérologique de la borréliose de Lyme commence par un test ELISA de dépistage semi-quantitatif. Si le résultat est négatif, cela signifie qu'aucun spirochète Borrelia n'a été détecté ou le résultat est un faux négatif.
Si le résultat est positif ou faiblement positif (équivoque), un test Western blot de confirmation, caractérisé par une spécificité élevée, doit être effectué.
Ceci confirme que les résultats ELISA sont "vrais". Pendant le diagnostic, vous ne pouvez ignorer aucune des étapes ci-dessus et, par exemple, effectuer immédiatement des diagnostics à l'aide de la méthode Western blot ou établir un diagnostic basé uniquement sur un résultat ELISA positif.
En Pologne, le diagnostic de la maladie de Lyme se termine très souvent au premier stade du dépistage, ce qui entraîne une mauvaise interprétation des résultats positifs ou faiblement positifs.
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Test de transformation des lymphocytes (LTT) Bon à savoirTest ELISA - prix. Combien coûte un test ELISA?
Le test coûte environ 60 PLN et est effectué immédiatement. Cependant, vous pouvez attendre environ trois mois pour les résultats de la référence.
Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être des faux positifs?
Les faux positifs résultent de la réactivité croisée des anticorps IgM avec d'autres protéines. Les anticorps produits par le corps peuvent reconnaître «incorrectement» un antigène d'autres micro-organismes comme l'antigène Borrelia.
Les «erreurs» les plus courantes se produisent chez les personnes infectées par le treponema pallidum, les herpèsvirus et chez les personnes atteintes de lupus érythémateux systémique et d'autres maladies rhumatismales.
Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être faux négatifs?
De faux résultats négatifs peuvent apparaître à un stade précoce de l'infection, auquel cas le test doit être répété après environ 3-4 semaines. C'est appelé fenêtre sérologique, c'est-à-dire la période initiale d'infection au cours de laquelle l'organisme n'a pas encore «réussi» à produire des anticorps spécifiques.
Il en va de même pour les personnes immunodéprimées qui ne produisent pas suffisamment d'anticorps.
Un gros problème, en particulier dans les infections très intenses, est l'apparition du soi-disant complexes immuns constitués d'antigènes de Borrelia spirochetes et d'anticorps qui leur sont spécifiques.
En conséquence, les anticorps deviennent «invisibles» pour les méthodes couramment utilisées telles que l'ELISA, et bien qu'ils soient présents dans le matériel testé, ils ne peuvent pas être détectés.
Dans de tels cas, le laboratoire peut utiliser la décomposition des complexes immuns. Ce traitement est conçu pour libérer les anticorps. Cependant, cette méthode n'est pas largement utilisée en raison du manque de normalisation dans les laboratoires.
Bon à savoirPourquoi le diagnostic de la maladie de Lyme n'est-il pas facile?
Cela est dû à la complexité de la réponse immunitaire contre Borrelia et aux limites des méthodes de laboratoire. La diversité des variétés et l'émergence de nouvelles variétés à l'origine d'infections, notamment sur le continent européen, ne facilitent pas le développement de méthodes de diagnostic efficaces.
D'autres variétés sont apparues récemment en Europe, telles que Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana et Borrelia spielmanii. De plus, dans le corps, les spirochètes Borrelia peuvent se transformer en kystes ou rester dans des endroits du corps inaccessibles aux cellules du système immunitaire.
Etre donc "invisible" pour le système immunitaire. De plus, il a été montré que les tissus peuvent contenir des fragments de bactéries qui ont des propriétés fortement pro-inflammatoires. On pense qu'ils sont responsables des symptômes chroniques de la maladie de Lyme, malgré les résultats des tests de laboratoire négatifs.
Littérature
1. Maladie de Witecka-Knysz E. et al. De Lyme: pourquoi le diagnostic est-il si difficile? Diagnostic de laboratoire, avril 2007.
2. Moore A. et al., Current Guidelines, Common Clinical Pitfalls, and Future Directions for Laboratory Diagnosis of Lyme Disease, États-Unis. Emerg Infect Dis. 2016 juil; 22 (7).
3. Diagnostic en laboratoire des maladies transmises par les tiques. Recommandations du Groupe de travail: Chambre nationale des diagnostics de laboratoire, Institut national de santé publique-Institut national d'hygiène, Consultant national dans le domaine des maladies infectieuses, Département des maladies infectieuses et des neuroinfections, Université médicale de Białystok, Société polonaise de virologie, Varsovie 2014
4. Hosseini S. et al.: Test d'immunosorbant lié à une enzyme (ELISA) de A à Z. Springer 2017.
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